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為取得最佳測(cè)定效果，在用單管的熒光測(cè)定儀測(cè)定時(shí)，樣品和測(cè)定試劑混合后到測(cè)定前的時(shí)間應(yīng)盡量控制在相同時(shí)間內(nèi)，例如30秒內(nèi)。
由于溫度對(duì)酶反應(yīng)有影響，所以測(cè)定時(shí)樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。
為保證熒光素酶檢測(cè)試劑的穩(wěn)定性，可以采取適當(dāng)分裝后避光保存的方法，以避免反復(fù)凍融和長(zhǎng)時(shí)間暴露于室溫。一般來說，如果不分裝使用三次(期間凍融三次)，對(duì)測(cè)定結(jié)果無明顯影響。
樣品和測(cè)定試劑混合后，必須等待1-2秒，再進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定時(shí)間通常為10秒，根據(jù)情況也可以測(cè)定更長(zhǎng)或更短時(shí)間，但是同一批樣品最好使用相同的測(cè)定時(shí)間。
為避免由于質(zhì)粒轉(zhuǎn)細(xì)胞時(shí)效率的差異而帶來的誤差，可以同時(shí)轉(zhuǎn)入Renilla熒光素酶的報(bào)告基因質(zhì)粒作為內(nèi)參，采用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)；也可以同時(shí)轉(zhuǎn)入β-半乳糖甘酶報(bào)告基因質(zhì)粒作為內(nèi)參，然后采用β-半乳糖苷酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。采用熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒中的報(bào)告基因細(xì)胞裂解液裂解獲得的樣品，可以直接用于β-半乳糖苷酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒中的測(cè)定。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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